Иммуноблот (ИБ)

Иммуноблот (ИБ)

ИБ - это метод, являющийся верификационным и позволяющим дать заключение об истинной позитивности, сомнительном результате или ложной серопозитивности (3,10). ИБ также относится к иммунохимическим методам, но, в отличие от ИФА, при постановке реакции выявляют не сумму антител, а спектр антител к белкам ВИЧ.

Принцип метода состоит в том, что в специализированных производственных условиях выращивают ВИЧ in vitro, вирусную массу многократно очищают от примесей и дезинтегрируют вирус. Затем фракционируют вирусные белки в полиакриламидном геле и переносят электрофорезом разделенные белки ВИЧ на нитроцеллюлозную мембрану, которую нарезают на полоски шириной 5 мм, именуемые стрипы. При проведении исследования стрипы с вирусными антигенами помешают в планшет, заливают исследуемой сывороткой, а полученные комплексы АГ-АТ проявляют с помощью иммунохимической реакции, аналогичный ИФА. Учет результатов визуальный: по наличию или отсутствию полос.

В сыворотке лиц, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим белкам: оболочки (env) - gp160, gp 120, gp41; ядра (gag) - p 17, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) - рЗ 1, p51, рбб. У ВИЧ-2 детектируются антитела к env - gp 140, gp!05, gp36; gag- pi 6, p25, p56; pol - p68.

Результаты, полученные в ИБ, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные (10). Согласно рекомендациям ВОЗ положительными считаются сыворотки, в которых обнаружены антитела к двум белкам reнa env в сочетании или без реакции с другими белками (gag, pol). При наличии взаимодействия с одним из белков оболочки в сочетании с другими белками реакция считается сомнительной и рекомендуется повторное тестирование с использованием набора другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, то рекомендуется исследование в течение 6 месяцев (2 недели, 3 мес, 6 мес.)

По мнению В.В.Покровского, возможна трактовка сывороток как положительных при наличии антител только к одному белку оболочки, особенно в тех случаях, когда речь идет об обследовании в очагах ВИЧ-инфекции. На основании только лабораторного анализа диагноз не может быть выставлен. Для вынесения диагностического заключения необходимо учитывать данные эпидемиологического анализа, клинического обследования (4). Известно, что ИБ является менее чувствительным, чем ИФА и зачастую дает результаты, которые трудно интерпретировать.

Источник: АХ. Рахманова, Е.Н. Виноградова, Е.Е. Воронин, А. А. Яковлев "ВИЧ-инфекция"

Общий портокол исследования

Напишите нам