Альтернативные методы серологического тестирования на ВИЧ

Альтернативные методы серологического тестирования на ВИЧ

Иммунофлюоресцентный анализ.

Это еще один метод обнаружения антител к ВИЧ, в основе которого лежит взаимодействие между сывороткой пациента и клетками, инфицированными ВИЧ. В качестве индикатора используется флюорохром.

Наборы для забора крови на дому.

Набор для забора образца крови для тестирования на ВИЧ на дому (Home Access Health Corp., Hoffman Estates, III; 800-HIV-TEST) продается в розничных аптеках, также его можно заказать по телефону (1-800-448-8378) и онлайн (www.homeaccess.com/04). Стоимость тестирования составляет примерно 59,99 долл. Капля крови берется из пальца при помощи скарификатора и наносится на полоску фильтровальной бумаги, которая затем отправляется почтой в защищенном конверте с анонимным кодом. Тестирование Home Access включает двукратный ИФА с подтверждением с помощью иммунофлюоресцентного анализа. Чувствительность и специфичность данного протокола приближаются к 100%. Протокол тестирования одобрен FDA, в отношении результатов тестирования соблюдается конфиденциальность. В случае положительного результата проводится консультирование по телефону, во время которого прошедшему тестирование рекомендуется обратиться в ближайшие к месту его проживания учреждения и службы, предоставляющие медицинскую и другие виды помощи ВИЧ-инфицированным. Из 174 316 домашних тестов, проведенных в 1996–1997 годах, 0,9% были положительными, и 97% клиентов позвонили в лабораторию, чтобы узнать результаты обследования. Компания продает около 60 000 тестов в год, и количество положительных результатов тестирования в 2003 году снова составило примерно 0,9%. Около 60% всех клиентов и 49% ВИЧ-инфицированных клиентов никогда раньше не обследовались на ВИЧ (JAMA 1998; 280:1699). Преимущества и недостатки такого вида «домашнего» тестирования служат предметом активных обсуждений (N Engl J Med 1995; 332:1296), однако в последнее время он завоевывает все большие одобрение и популярность (N Engl J Med 2006; 354:437).

Экспресс-тесты

FDA утвердило к применению четыре серологиче- ских экспресс-теста (см. таблицу 2.2), которые проводятся с разным биологическим материалом и относятся к разным категориям CLIA (www.cdc.gov/hiv/rapid_testing).

Таблица 2.2. Экспресс-тесты на ВИЧ, одобренные FDA

* При исследовании образца цельной крови не требуется проводить центрифугирование или использовать другое лабораторное оборудование.
** Требования CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendment — Поправка к Закону, направленная на улучшение качества работы лабораторной службы) включают аккредитацию лаборатории и соблюдение установленных CLIA стандартов проведения лабораторных тестов, стандартов контроля качества и т. д.

Проведение экспресс-тестов регулируется CLIA (Поправкой к Закону, направленной на улучшение качества работы лабораторной службы) 1988 года. Экспресс-тесты относятся к двум категориям CLIA: «простым» и «средней сложности». OraQuick и Uni-Gold относятся к простым тест- системам; это означает, что для их применения не требуется наличия специального образования у медицинского персонала, контроля качества проведения тестов и профессионального уровня персонала. Эти тесты могут проводиться в лабораториях, клиниках, машинах медицинских служб, кабинетах врачей и т. п. Для проведения этих тестов необходимо получить специальный «Отказной сертификат» (Certificate of Waiver) и строго следовать инструкциям фирмы-изготовителя (см. веб-страницу www.phppo.cdc.gov/clia/regs/toc/aspx). Reveal и Multispot HIV-1/HIV-2 относятся к категории лабораторных тест-систем «средней сложности»; для получения права на работу с этими тест-системами лаборатория должна пройти специальную процедуру регистрации и отвечать стандартам CLIA, касающимся профессиональной подготовки работников лаборатории, системы оценки качества проведения исследований, контроля профессиональных знаний и навыков работников лаборатории, участия в мероприятиях по контролю качества. Для проведения тестов Reveal и Multispot требуются образцы плазмы или сыворотки, следовательно, необходимо центрифугирование крови. При проведении любого из четырех тестов:

• все пациенты, проходящие тестирование, должны получить специальный информационный буклет для пациентов; эти буклеты поставляются в комплекте с диагностическими наборами;
• отрицательный результат тестирования свидетельствует об отсутствии антител к ВИЧ и не нуждается в подтверждении другими тестами, однако следует помнить о периоде «окна» (первые 3 месяца после заражения ВИЧ), когда антитела к ВИЧ еще не обнаруживаются;
• положительный результат тестирования рассматривается как предварительный и должен быть подтвержден с помощью вестерн блота (иммуноблоттинга) или иммунофлюоресцентного анализа. При подтверждении диагноза ВИЧ-инфекции только с помощью тестов, основанных на методах иммуноферментного анализа, можно получить ложноотрицательный резуль- тат (MMWR 2004; 53:221);
• при получении неопределенного результата тестирование следует провести повторно через месяц.

Чувствительность и специфичность этих экспресс-тестов стабильно превышают 99% (J Acquir Immune Defic Syndr 1993; 6:115; Am J Emerg Med 1991; 9:416; Am Intern Med 1996; 125:471; J Human Virol 2001; 4:278; Internat J STD AIDS 2002; 13:171; J Clin Microbiol 2003; 41:3868; J Lab Med 2003; 27:288), однако прогностическая ценность положительного результата зависит от распространенности ВИЧ-инфекции; соответствующие данные, свидетельствующие о необходимости проведения подтверждающих тестов, приведены в таблице 2.3. Экспресс-тесты рекомендованы для широкого применения, но наибольшую пользу они приносят в ситуациях, когда очень важно быстро узнать результат тестирования, например, после контакта с ВИЧ на рабочем месте (MMWR 2001; 50[RR- 11]:1; Infect Control Hosp Epidemiol 2001; 22:289), при определении ВИЧ- статуса необследованных рожениц (JAMA 2004; 292:219), во время выездной работы с группами риска (MMWR 2006; 55:673), а также при обследовании пациентов, которые с малой вероятностью придут за результатами тестирования, в том числе посетителей венерологических клиник и пациентов, которым оказывается неотложная помощь (MMWR 1998; 47:215). При применении «простых» (по классификации CLIA) тест- систем от забора материала до считывания результата теста проходит в среднем 45 минут (www.cdc.gov/hiv/rapid_testing).

Таблица 2.3. Прогностическая ценность положительного результата однократного тестирования на ВИЧ*

* Branson B, www.cdc.gov/hiv/topics/testing/rapid/index.htm

Анализ слюны.

OraSure (OraSure Technologies, Inc.; Бетлехем, Пен- сильвания; 800-672-7873; www.orasure.com) — одобренное FDA устройство для забора слюны, которое накапливает высокую концентрацию IgG для последующего исследования материала методом ИФА на антитела к ВИЧ. Тест-система OraSure включает устройство для забора материала, набор для ИФА на наличие антител к ВИЧ-1 Vironostika фирмы bioMerieux и набор для проведения вестерн блота при необходимости подтверждения положительных результатов; стоимость тестирования составляет 24,15 доллара. Этот тест можно пройти в муниципальных медицинских учреждениях, врачебных кабинетах частной практики, социальных службах и службах помощи ВИЧ-инфицированным; также устройство для забора слюны можно получить, позвонив по телефонам 800-Ora-Sure или 800-672-7873. Результаты тестирования можно узнать по телефону или получить по факсу через три дня. В этом тесте используется специально обработанная тест-полоска, которую сначала прикладывают к десне для пропитывания слюной, а затем помещают в пробирку на 20 минут. Результат считывают через 20–40 минут. Количество IgG, получаемое данным методом из слюны, гораздо выше, чем в плазме, и превышает уровень 0,5 мг/л, необходимый для обнаружения антител к ВИЧ. Согласно результатам тестирования на ВИЧ 26 066 пациентов, чувствительность исследования на ВИЧ образцов слюны составила 99,24%, а специфичность — 99,89% по сравнению с исследованиями на ВИЧ образцов крови; всего было 56 (0,22%) дискордантных результатов (AIDS 2006; 20:1661). Полученные в одном учреждении 16 ложноположительных результатов тестирования слюны на ВИЧ снизили показатель специфичности до 99% (AIDS 2006; 20:1655). К преимуществам этого метода по сравнению со стандартным серологическим тестированием относятся легкость забора материала, небольшая стоимость и большая привлекательность для пациентов. На рассмотрение FDA было выдвинуто предложение разрешить безрецептурную продажу этой тест-системы для домашнего использования (N Engl J Med 2006; 354:437).

Анализ мочи.

Диагностический набор для проведения ИФА мочи на ВИЧ-1 Calypte (Calypte Biomedical Corp; Аламеда, Калифорния; 877-225- 9783; www.calypte.com) утвержден FDA как скрининговый метод. Этот тест может проводиться только врачом, и положительные результаты необходимо подтверждать при помощи стандартного протокола серологического тестирования, включающего вестерн блот. По результатам исследований, чувствительность теста составляет 99% (88 из 89), специфичность — 94% (49 из 52) (Lancet 1991; 337:183; Clin Chem 1999; 45:1602; Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2004; 23:831). Фирма-изготовитель включила в набор информационный листок для дотестового консультирования, который должен быть прочитан пациенту и подписан им перед проведением теста. В продаже есть комплекты из 192 индивидуальных диагностических наборов за 816 долл. или из 480 наборов за 1920 долл. Таким образом, стоимость одного набора составляет около 4 долларов.

Обнаружение вируса

Другие методы диагностики ВИЧ-инфекции включают выявление провирусной ДНК ВИЧ-1 методом ПЦР или РНК ВИЧ-1 методами рДНК или ОТ-ПЦР. Самым чувствительным методом является ПЦР на ДНК ВИЧ-1, с его помощью можно обнаружить от 1 до 10 копий провирусной ДНК ВИЧ, однако реактивы для данного метода пока должным образом не стандартизованы и не утверждены FDA. Ни одна из этих методик не дает более точных результатов, чем стандартный протокол серологического тестирования, но они могут быть полезны для уточнения неопределенных результатов серологических тестов, а также для диагностики ВИЧ-инфекции в случаях, когда серологическое тестирование может со значительной вероятностью дать ошибочный результат, например, у пациентов с агаммаглобулинемией, острой ретровирусной инфекцией, у новорожденных и у пациентов в «периоде окна» после инфицирования. В большинстве случаев положительные результаты серологического теста достаточно подтвердить с помощью повторного серологического теста.

Источник: www.eurasiahealth.org