»
Главная
»
Тест-системы на ВИЧ-специфические антитела
В настоящее время существует большой арсенал лабораторных методов для скрининга крови, диагностики инфекции и мониторинга прогрессии заболевания у лиц, зараженных ВИЧ. Эти методы предназначены для (а) выявления антител, (б) идентификации антигена, (в) слежения за содержанием нуклеиновых кислот вируса и (д) оценки содержания Т-лимфоцитов (фенотипирование клеток). В настоящей статье речь пойдет, главным образом, о выявлении антител. Этот способ применяется наиболее широко и наиболее эффективен для выявления ВИЧ инфекции.
Анализы для выявления антител против ВИЧ можно подразделить на следующие классы: (а) тесты для скрининга (т.е. выявления) всех инфицированных лиц и (б) подтверждающие (дополнительные) анализы, предназначенные для идентификации лиц, которые не являются инфицированными, но дали положительные результаты при первичном скрининге. Соответственно, анализы, предназначенные для скрининга, обладают высокой степенью чувствительности, в то время как подтверждающие анализы обладают высокой специфичностью. Анализы, обладающие высокой чувствительностью, дают небольшое число ложно-отрицательных результатов, а анализы, обладающие высокой специфичностью, дают небольшое число ложно-положительных результатов. Названные типы анализов, выполняемые в тандеме (друг за другом), дают результаты, характеризующиеся высокой точностью, надежностью и способностью обеспечить защиту банков крови или оказать помощь в диагностике ВИЧ инфекции. Иногда происходят технические ошибки, кроме того, существуют и биологические факторы, которые могут ограничивать точность анализов на ВИЧ. Поэтому, наряду с тестированием, существует требование наличия экстраординарной и прицельной программы гарантии качества (1). Безотносительно к результатам, поскольку лабораторные анализы никогда не являются совершенными, такие программы предназначены для того, чтобы дополнять клинический диагноз.
Специфические антитела против ВИЧ образуются вскоре после инфицирования, однако точное время их появления зависит от нескольких факторов, включая характеристики организма хозяина, а также вируса. Важно отметить, что антитела могут присутствовать в низких концентрациях на ранних стадиях инфекции, однако их концентрация может быть ниже предела чувствительности некоторых методов. При использовании анализов первого поколения антитела можно было обнаруживать у большинства лиц через 6-12 недель после инфицирования. Анализы новых поколений, включая анализы третьего поколения с использованием сэндвича антигенов, могут выявлять антитела уже через 3-4 недели после инфицирования (2). Следует отметить, что латентный период не дожидаясь обнаружения антител можно сократить на несколько дней, используя анализы на антиген, и еще на несколько дней путем определения нуклеиновой кислоты вируса (3). Соответственно, у большинства лиц латентный период может иметь продолжительность лишь от 2 до 3 недель, если использовать всестороннюю стратегию выявления вируса. Большинство методов анализа антител, имеющихся в настоящее время на рынке, обладают почти идеальной и близкой чувствительностью для выявления большинства лиц, инфицированных ВИЧ (эпидемиологическая чувствительность), однако эти методы отличаются по своей способности выявлять низкие концентрации антител (аналитическая чувствительность метода), например в период до полной сероконверсии (2). Хотя существуют методы для выявления специфических антител к ВИЧ класса IgM, эти тесты нашли небольшое применение для выявления ранней инфекции, поскольку образование IgM в ответ на ВИЧ не является воспроизводимым на ранних стадиях инфекции (4). Способность некоторых методов (анализы третьего поколения) выявлять антитела класса IgM одновременно с антителами класса IgG может объяснять более высокую аналитическую чувствительность таких методов.
При лабораторной диагностике ВИЧ само по себе наличие специфических антител говорит о том, что инфицирование произошло. Для правильности диагноза, однако, необходимо использовать анализы, которые эффективны для выявления ВИЧ антител, а не антител в отношении других инфекционных агентов, которые могут быть в антигенном отношении сходными с ВИЧ. Антигены, применяемые в диагностических анализах на ВИЧ, должны обладать достаточной специфичностью и обычно представляют собой очищенные антигены из вирусных лизатов или антигены, полученные с помощью рекомбинантной технологии или технологии синтетических пептидов. Анализы с использованием таких антигенов для скрининга на ВИЧ обладают как высокой чувствительностью (для выявления инфекции), так и специфичностью (для выявления неинфицированных больных). В Соединенных Штатах анализы, предназначенные для скрининга на ВИЧ, должны иметь лицензию, полученную от FDA, независимо от того, используются ли они для скрининга крови, постановки диагноза или мониторинга заболевания.
Независимо от того, какой конкретный анализ используется для скрининга, образцы сыворотки или плазмы сначала подвергаются испытанию (скринированию) с использованием анализа с высокой чувствительностью, чаще всего таким анализом является иммуноферментное определение (ИФА, ELISA), "быстрый тест" или "простой метод" (см. ниже). ELISA представляет собой наиболее широко используемый метод скрининга, а два других метода дают более быстрые результаты, позволяя использовать простые процедуры, так что эти определения можно осуществить непосредственно при оказании медицинской помощи, а также в развивающихся странах. В связи с появлением новых способов лечения ВИЧ инфекции и в связи с рекомендацией начинать лечение немедленно (в пределах 2 часов) после экспозиции (5), быстрые методы анализа являются наиболее подходящим способом для анализа больного, являющегося источником инфекции после экспозиции (например, после укола иглой).
Независимо от того, какой метод был использован для скрининга, образец, дающий положительный результат, должен анализироваться заново в двух повторностях, причем по крайней мере два из этих трех полученных результатов должны быть положительными (воспроизводимо положительными), прежде чем вопрос об инфекции будет решаться с помощью подтверждающего анализа. Наиболее частой причиной невоспроизводимых результатов при скрининге является техническая ошибка.
Сыворотки, дающие воспроизводимо положительный результат в ходе скрининга, должны далее анализироваться с использованием подтверждающего метода или группы подтверждающих стратегий (см. ниже). Хотя анализы, используемые для скрининга, являются исключительно чувствительными, у них отсутствует достаточная степень специфичности. Примером является их малая предсказательная ценность при обследовании популяции с низкой распространенностью инфекции. При испытании группы, состоящей из 100 лиц, анализ при специфичности 99% даст в среднем один ложно-положительный результат. Если одно лицо в этой группе является действительно инфицированным, то в результате анализа будет получено два положительных результата (один от инфицированного лица, и другой ложно-положительный). Поэтому, если положительный результат обнаруживается при тестировании указанных ста лиц, вероятность того, что он является точным, составляет всего лишь 50%. Соответственно, для того чтобы отличить истинно-положительные результаты от ложно-положительных, необходимо проведение дополнительных анализов. Полный обзор методов скрининга, и использования индексов анализов опубликованы (1).
"Тест-системы на ВИЧ-специфические антитела" Н. Константайн, Медицинская школа Университета Мэрилэнд